發表者:北京博奧森生物 發表時間:2016-2-15
使用基因工程的方法來表達蛋白質,必須經過純化才能實現最終目的。不同性質的蛋白質純化條件有所不同,亦很難摸索。所以將目的蛋白和一個親和純化的標簽蛋白進行融合表達-通過親和純化Tag蛋白來純化目的蛋白,就成為常用的間接手段。
而His-Tag這個只有6個組氨酸大小的標簽蛋白在pH值8.0時不帶電,幾乎沒有免疫原性。經過對很多種蛋白的融合驗證試驗,無論對蛋白的分泌、折疊結構、甚至功能都沒有影響,即可放在N端也可放在C端,而更重要的是使用6HIS抗體裝配的親和層析純化柱,通過免疫親和層析純化的方法-將帶有6個組氨酸標簽的目標蛋白純化出來,不但目標蛋白純度高,而且簡單、易行,成本低。所以對融合蛋白純化很方便、實用。因此,已得到國內外人員的廣泛應用。
His-Tag的特點:
1) 6xHis與不同的Sepharose純化填料結合(捆綁),可不受構象的影響,在天然或變形的條件下可進行進一步純化。
2) 可在溫和的洗脫液環境中,其結合、洗滌及洗脫步驟不會對蛋白結構產生影響。
3) 6xHis標簽比普通(Tag)要小得多,經純化后的蛋白可直接進行下游操作。可用于任何表達系統(包括:細菌,桿狀病毒和哺乳動物)
4) 6xHis標簽在生理溶液pH下不帶電荷,其標簽不會干涉重組蛋白的結構和功能, 6xHis不會影響蛋白分泌
5) 6xHis標簽免疫原性差,重組蛋白可以不必除去標簽而直接作為抗原進行免疫
博奧森生物技術公司已成功開發His-Tag-6個組氨酸抗體。